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hiv抗體陰性的檢測方法

來源:美型男    閱讀: 1.83W 次
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hiv抗體陰性的檢測方法

目前作爲一種診斷工具使用,主要包括抗艾滋病病毒抗體檢測、病毒培養、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是最常規使用的方法,這不但是由於這類檢測特異性、敏感性較高,方法相對簡便、成熟,更重要的原因是HIV抗體在病毒感染後除早期短暫的”窗口期”外的整個生命期間長期穩定地存在並可被檢測到。在一些特殊情況下,當抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時,病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作爲輔助手段使用,這包括對非典型血清學反應樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。

檢測方法

酶聯免疫吸附試驗

目前應用的ELISA法有8種之多。它們的特異性和敏感性超過99%。

顆粒凝集法

PA爲快速、簡便的一種篩選方法。如屬陽性,應經WB證實。PA不需任何特殊儀器,其結果用肉眼可判別。全過程僅需5分鐘。缺點有假陽性,且價格昂貴。

快速試劑

(一)人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體診斷試劑(膠體硒法)

人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒是用於在體外,肉眼觀察,定性免疫測定法,對血清或血漿中HIV-1和HIV-2抗體檢測有助於感染者HIV-1和HIV-2抗體。本品僅用於無償獻血者在現場篩查和臨牀急救時使用,本品檢測陽性,需進行進一步的篩選確認。

(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金標快速診斷試劑

InstantCHEKTM-HIV1+2是一種快速、簡單、靈敏的檢驗方法,用以檢測艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗體。該方法適用於初篩檢測,凡由該試劑測定爲陽性者,需用另一種方法檢測如ELISA或用蛋白印記法確定。

確認實驗

免疫印跡試驗(WB)、條帶免疫試驗(LIATEK HIVⅢ)、放射免疫沉澱試驗(RIPA)及免疫熒光試驗(IFA)。國內常用的確認試驗方法是WB。

免疫印跡實驗(westernblot,WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法,就HIV的病原學診斷而言,它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法,WB的檢測結果常常被作爲鑑別其他檢驗方法優劣的“金標準”。

確認試驗流程

有一種HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。第一個HIV-1/2混合試劑檢測,如果有消極反應,HIV抗體陰性報告;如果有一個積極的報告HIV-1抗體陽性;如果不滿足標準陽性,判爲HIV抗體檢測結果是不確定的。

如果出現HIV-2型的特異性指示條帶,需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗,呈陰性反應,報告HIV-2抗體陰性;呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析,

WB的敏感性一般不低於初篩實驗,但它的特異性很高,這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化,能夠檢測針對不同抗原成分的抗體,因而能夠用WB方法鑑別初篩實驗的準確性。從WB確認試驗結果看出,初篩試驗儘管選擇質量較好的試劑,如第三代ELISA,仍會有假陽性出現,必須通過確認試驗才能得出準確結果。

免疫熒光實驗(IFA)

IFA法經濟、簡便、快速,曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡,需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響,結果不宜長期保存,IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。

HIV抗體確證試驗結果報告

(1)符合HIV-1抗體陽性判斷標準,報告“HIV-1抗體陽性(+)”,並按規定做好檢測後諮詢、保密和疫情報告工作。符合HIV-2抗體陽性判斷標準,報告“HIV-2抗體陽性(+)”,並按規定做好檢測後諮詢、保密和疫情報告工作。

(2)符合HIV抗體陰性判斷標準,報告“HIV抗體陰性(-)”。如疑似“窗口期”感染,建議進一步做HIV核酸檢測,儘早明確診斷。

(3)符合HIV抗體不確定判斷標準,報告“HIV抗體不確定(±)”,在備註中應註明等待“4周後複檢”。