１、克羅米酚試驗
克羅米芬是非固醇類激素，有弱的抗雌激素作用，可促進FSH，LH分泌，對有一定量內源性雌激素有效。對孕激素試驗陽性反應者在撤藥出血的第5日起口服克羅米芬50~100mg/日，共5日，通過BBT和B超觀察用藥後月經和排卵反應。本試驗陽性常提示輕度下丘腦性閉經。如果臨牀或生化證實有良好反應，則基本上可排除生殖軸的器質性病變。
克羅米芬試驗還適用於懷疑延遲發育的婦女，以判定其生殖軸是否正常，如測定FSH與LH均減退，克羅米酚試驗常陰性，故不必採用。
２、促性腺激素試驗
克羅米芬試驗陰性，孕激素試驗或雌孕激素試驗陽性者，於撤藥出血第5日起肌注HMG 70~150iu/日，在連續用藥過程中，經監測提示卵泡成熟時，再肌注hCG 5000~10000iu/日，若有排卵即促性腺試驗陽性。
３、孕激素試驗
要求是估計內源性雌激素水平和下生殖道的通暢性，並測定催乳素水平。用黃體酮油劑，每日肌注20mg，連續3日;或口服安宮黃體酮，每日10~20mg，連用5日。停藥後3~7日出現撤藥出血。提示下生殖道通暢，且子宮有內膜並受一定水平雌激素影響(E2>146。8pmol/L)。外源性孕激素使其發生分泌期變化，停藥後內膜剝脫而出血。
在給予任何激素之前，抽血作激素測定。首先測定血催乳素。如孕激素撤血陽性，無泌乳，催乳素在正常水平，這三個現象同時存在，就可有效地排除垂體腫瘤。
４、雌激素試驗
若孕激素試驗無撤藥出血，有兩種可能：或者下生殖道不通暢，或者體內雌激素水平低下，以致對孕激素無反應，應進一步作雌激素試驗。患者每晚睡前服己烯雌酚1mg，連續20日或用苯甲酸雌二醇，隔日肌注2mg，共10天，最後5日加用安宮黃體酮，每日口服10mg。停藥後3~7日常導致撤藥出血，若無撤藥出血，則應重複一次雌激素試驗，若仍無出血，提示子宮內膜有缺陷或生殖道不通暢，婦科檢查通常可瞭解有無內外生殖道異常;仔細詢問病史也可瞭解有無感染或創傷(刮宮)形成的子宮內粘連。可結合檢查診斷子宮性閉經。如停藥後有撤藥性出血，提示子宮內膜功能正常，對甾體激素有反應，閉經是由於患者體內雌激素水平低落所致，應進一步尋找原因。
５、激素測定
在恰當的時間採取樣本測定血中的各種激素水平，可獲得卵巢的功能狀態及其影響環節等各方面較多的信息，如確定卵巢是否已喪失分泌雌激素的能力，或因缺乏促性腺激素而卵巢不分泌甾體激素。用放射免疫法測定促性腺激素，按血清FSH、LH、PRL、E2值來鑑別卵巢或垂體性排卵障礙與閉經。PRL正常值爲0~20ug/L，PRL>25ug/L，而FSH、LH水平低，則屬高催乳素血癥(Hyperprolactinemia)，PRL升高時應進一步作頭顱X線攝片或CT檢查，排除垂體腫瘤。月經週期中FSH正常值爲5~20iu/L，LH爲5~25iu/L。如FSH、LH值>40iu/L，此時可能的情況有：卵巢功能障礙、卵巢早衰，或卵巢發育不全、卵巢不敏感綜合徵、分泌促性腺激素的腫瘤、17羥化酶缺乏引起的原發性閉經等。對原發性閉經患者，應作染色體核型分析及分帶檢查。若LH>25iu/L而FSH值正常、E2偏高或正常，特別是LH/FSH>3時，則可能爲多囊卵巢綜合徵，這時測定雄激素可發現雄烯二酮常上升;若FSH，LH均<5in/L，示垂體功能減退，病變可能在垂體或下丘腦，而垂體與下丘腦病變的區別，需藉助GnRH試驗，如結果不明確，則作蝶鞍多向斷層攝片或CT檢查有無異常。在多向斷層攝片異常時進行眼底檢查。
６、GnRH垂體興奮試驗
典型方法：常用10肽 LHRH 100ug溶於生理鹽水5ml中，30秒鐘內靜脈注射完畢。分別於注射前及注射後15，30，60，120分鐘採取2ml靜脈血測LH含量，若注射後15~60分鐘LH值較注射前高2~4倍以上，而且絕對值比原來增加7。5ug/L以上，說明垂體功能良好，病變在下丘腦;若經多次重複試驗，LH值仍無升高或增高不顯著，提示病變在垂體。
Combes方法：將LHRH 100ug靜脈滴注4小時，正常情況在滴注後30~45分鐘LH上升，60~90分鐘時下降，2~4小時內LH第二次上升。雙相型分泌可用垂體促性腺激素存在兩個功能池的理論來解釋：即分泌池在LHRH刺激下立即釋放LH;合成、貯存池則在LHRH大量或長期刺激下釋放已貯存與新合成的LH。此法可準確區別下丘腦或垂體病變。若病因在下丘腦而引起垂體惰性，則LHRH推注試驗可能陰性，而滴注試驗可在2小時左右出現延遲反應。若垂體功能有缺陷，LH雖有第一次上升，但不能維持，且不出現第二次上升，提示垂體合成LH的功能受限，故如疑有創傷、手術、輻射等因素導致垂體功能不足時，爲靜脈滴注GnRH刺激試驗的適應指徵。
7、ACTH興奮試驗
ACTH 20mg，肌注，分別測用藥前和後24小時尿17-酮類固醇排泄量。PCO者反應正常，而腎上腺皮質功能異常者17-酮類固醇和17-羥類固醇均明顯增高。
8、地塞米松抑制試驗
適用於排卵障礙伴高雄激素血癥或男性化患者。地塞米松0。5mg，每6小時一次，共2日或7日，比較用藥前尿17-酮類固醇、17-羥類固醇、血睾酮、血脫氫表雄酮等變化。若垂體-腎上腺皮質軸功能正常，則用藥後由於負反饋作用，抑制ACTH，尿17-酮類固醇和17-羥類固醇值降低。但Cushing綜合徵或腎上腺皮質腫瘤患者則不降低。
9、促甲狀腺素釋放素(TRH)刺激試驗
TRH爲一種三肽，能刺激垂體細胞，分泌促甲狀腺素與催乳素。患者先排尿，臥牀休息20分鐘。將100ug TRH溶於生理鹽水中快速靜脈注射。在5，10，15，30與60分鐘抽血作測定。
